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蛋白純化通用問題(一)

日期:2022-09-14 13:15
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摘要:蛋白純化通用問題(一)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下蛋白純化通用問題(一)。
1、層析柱的壽命多久,可以用多長時間?
答:填料的使用次數依據不同的目的和條件而有差異。在使用過程中注意操作規范,定期清潔維護,可以使柱子保持*佳狀態。

2、柱子堵了,超壓如何處理?
答:可能原因 :緩沖液或樣品未進行過濾、蛋白沉淀或雜質殘留、清洗不及時等引起層析柱濾膜堵塞 ;流速過快、流動相粘度 ( 如乙醇等 ) 過高、溫度過低。
建議處理方法 :首先將柱子卸下來,確定是系統還是柱子堵了。如果是柱子堵了 :參考說明書 CIP 操作進行清潔 ;更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 。測定柱效或重復之前做過的樣品。后續,注意樣品前處理 ( 如核酸的去除、樣品緩沖液條件 ) 以及層析柱的日常維護。

3、如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質污染?
答:延長超聲時間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時消化 DNA 和 RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液,含有大量的DNA,可以用鏈霉素沉淀等方法,預先去除大量的 DNA。
通過層析方法去除 :由于核酸帶負電,在陰離子柱上會結合或陽離子柱上流穿,也可以有效去除核酸。
去除填料上結合的核酸 : 一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對核酸的去除效果較好(需要確認填料是否可耐受NaOH)。如果核酸的吸附過強,會采用強烈的方法,3M 氯化鈉去除靠靜電吸附的核酸,然后用 1M 的氫氧化鈉分解核酸,之后再用 3M NaCl 清洗。
可用Heparin預裝柱或者填料:如果樣品是核酸結合蛋白,Heparin可結合核酸結合蛋白,從而使核酸流穿。 貨號:17040601,17099801

4、柱子進氣泡或跑干了,怎么辦?
答:可能的原因 :環境溫度變化 ;緩沖液未經過脫氣 ;層析柱連接系統或操作不當。
建議處理方法 :用大量脫氣去離子水或 20% 乙醇反向高速沖洗層析柱,直到小氣泡被帶出 ( 沖洗過程建議在系統連接反壓閥之后進行) 。如果大量進氣,建議重新裝柱。

5、不同樣品檢測的吸光度值?
答:蛋白樣品*大吸收值一般在 280 nm,核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ;多肽 215 nm ;多糖 206 nm。

6、柱子有色素如何去除?
答:色素性質很復雜,可以根據填料的耐受情況,優先嘗試NaOH 清洗,另外,也可以使用有機溶劑(如 30% 異丙醇或乙醇),*后再嘗試酸,如 0.01 M HCl(需要確認填料耐受性)。 如果去除不掉,可以定期把色素污染部分的填料去除。

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于蛋白純化通用問題(一)。
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